在有機(jī)化合物分析領(lǐng)域，液相色譜儀（HPLC）始終是的核心設(shè)備 —— 它憑借對(duì)高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定及大分子有機(jī)化合物的精準(zhǔn)檢測(cè)能力，成為科研與工業(yè)檢測(cè)中的 “得力助手”。

從結(jié)構(gòu)來看，一套完整的HPLC系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、高壓泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄儀等關(guān)鍵部件組成。分析過程其實(shí)像一場(chǎng)“精準(zhǔn)篩選”：儲(chǔ)液器里的流動(dòng)相，會(huì)在高壓泵的推動(dòng)下平穩(wěn)進(jìn)入系統(tǒng)；待測(cè)樣品通過進(jìn)樣器“搭乘”流動(dòng)相，一同進(jìn)入填充著固定相的色譜柱。由于樣品中不同組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不一樣，它們會(huì)在兩相中反復(fù)經(jīng)歷吸附與解吸附，遷移速度隨之產(chǎn)生明顯差異，終實(shí)現(xiàn)高效分離。分離后的組分依次流出色譜柱，經(jīng)檢測(cè)器轉(zhuǎn)化為清晰的電信號(hào)，再由記錄儀以圖譜形式呈現(xiàn)，為后續(xù)分析提供直觀依據(jù)。也正因如此，HPLC在生命科學(xué)研究、食品安全性檢測(cè)、藥物研發(fā)試驗(yàn)和生產(chǎn)質(zhì)控，以及環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)等多個(gè)關(guān)鍵領(lǐng)域，都有著廣泛且重要的應(yīng)用。

作為當(dāng)前使用頻率高的色譜分析技術(shù)之一，HPLC 的核心組件與氣相色譜有相似之處，但因?yàn)榱鲃?dòng)相是液體，系統(tǒng)設(shè)計(jì)上做了不少針對(duì)性調(diào)整。比如，輸液泵必須保證流量平穩(wěn)恒定，才能確保分析結(jié)果準(zhǔn)確；進(jìn)樣系統(tǒng)得操作便捷且密封良好，避免樣品泄漏影響數(shù)據(jù)；另外，液體流動(dòng)相粘度比氣體高，為了降低柱壓，HPLC 的色譜柱通常直徑更粗，長度也比氣相色譜柱短不少。這些設(shè)計(jì)細(xì)節(jié)，讓 HPLC 能覆蓋絕大多數(shù)有機(jī)化合物的定性與定量分析需求。

實(shí)際分析時(shí)，樣品溶液注入色譜柱后，會(huì)在高壓作用下沿著固定相遷移。不同組分因?yàn)榕c固定相的相互作用力不同，會(huì)先后流出色譜柱，檢測(cè)器捕捉到這些組分后形成對(duì)應(yīng)的峰信號(hào)，通過解析峰信號(hào)就能清晰判斷樣品的具體組成。雖然 HPLC 的分離原理和經(jīng)典液相色譜一致，但現(xiàn)代 HPLC 融入了高壓輸液泵、高靈敏度檢測(cè)器以及微粒固定相等先進(jìn)技術(shù)，大幅提升了分析效率與準(zhǔn)確性，尤其適合處理高沸點(diǎn)、大分子以及不同極性范圍的有機(jī)化合物，為科研和工業(yè)檢測(cè)提供了更可靠的技術(shù)支持。

表1.HPLC 系統(tǒng)核心組成及功能

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液相色譜儀（HPLC）常見故障及實(shí)用處理方法

1. 柱壓過高

柱壓過高是 HPLC 使用中常見的問題，多是因?yàn)榫彌_液中的鹽析出后積聚在柱內(nèi)，或是樣品殘留導(dǎo)致色譜柱污染。

若確定是鹽析出，可先用 40~50℃的純水，以低速正向沖洗色譜柱，等柱壓逐漸下降后慢慢提高流速，之后換成常溫純水繼續(xù)沖洗，后用純甲醇沖洗約 30 分鐘，就能有效清除柱內(nèi)積鹽；

要是樣品污染導(dǎo)致的柱壓高，建議用純水反向沖洗色譜柱，接著依次用甲醇、甲醇 - 異丙醇混合液（比例 4:6）、甲醇和純水清洗，后再用純甲醇正向沖洗 30 分鐘，恢復(fù)色譜柱性能。

2. 流動(dòng)相中出現(xiàn)氣泡

流動(dòng)相里有氣泡，往往是因?yàn)檫^濾器長期浸泡在乙酸銨等緩沖液中，滋生微生物造成堵塞。處理時(shí)可將過濾器浸入5%的硝酸溶液，用超聲清洗幾分鐘；也可以浸泡在5%硝酸溶液12~36小時(shí)后，用純水沖洗干凈，然后開啟儀器的purge功能排除氣泡，再打開泄壓閥，用純水沖洗過濾器約1小時(shí)，就能解決氣泡問題。

3. 無液流或無壓力顯示

遇到儀器無液流或無壓力顯示的情況，大概率是泵密封墊片磨損，或是泵體內(nèi)進(jìn)入了大量空氣。

若是密封墊片磨損，直接更換新的墊片即可；

要是泵體內(nèi)有氣泡，可在泵出口處連接 50ml 注射器，通過注射器輔助抽氣，排出泵內(nèi)空氣后就能恢復(fù)正常。

4. 壓力波動(dòng)或流量不穩(wěn)

壓力波動(dòng)、流量不穩(wěn)，主要是系統(tǒng)中存在空氣，或是單向閥的寶石球與閥座之間有雜質(zhì)導(dǎo)致的。

首先要確保流動(dòng)相充分脫氣，同時(shí)檢查儲(chǔ)液器內(nèi)的液位是否充足，避免空氣進(jìn)入系統(tǒng)；

若懷疑是單向閥問題，可將單向閥拆下，放入丙酮中用超聲清洗，清除雜質(zhì)后重新安裝，就能改善壓力和流量穩(wěn)定性。

5. 峰面積重復(fù)性差

峰面積重復(fù)性差，可能是進(jìn)樣閥漏液、進(jìn)樣針未完全到位，或是樣品量不足造成的。

先檢查進(jìn)樣閥的密封性，若有漏液及時(shí)維修或更換部件；

操作時(shí)確保進(jìn)樣針完全插入到位，同時(shí)確認(rèn)樣品溶液的體積符合分析要求，就能提升峰面積的重復(fù)性。

6. 色譜峰分叉或峰形異常

色譜峰出現(xiàn)分叉或峰形異常，常見原因是色譜柱污染或柱頭填料塌陷。

若為色譜柱污染，按照對(duì)應(yīng)的清洗流程對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗即可；

要是柱頭填料塌陷，需先清除柱頭頂層受損的填料，然后重新填充新的填料，滴加甲醇?jí)簩?shí)，后用甲醇沖洗柱頭至潔凈，恢復(fù)色譜柱的分離效果。

表2.HPLC 常見故障及解決方案?

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