高效液相色譜儀基線不穩(wěn)定?噪聲大、漂移問題全解析

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作者:依利特 來源:液相售后 2025-08-06 11:08:05

在實(shí)驗(yàn)室里做高效液相色譜(HPLC)分析,基線穩(wěn)定是實(shí)驗(yàn)?zāi)茼樌M(jìn)行的基礎(chǔ),數(shù)據(jù)準(zhǔn)不準(zhǔn)全看它。 基線要么布滿毛刺,噪聲大得讓人頭疼;要么就慢慢往上飄,或者一個(gè)勁兒往下掉。這些問題不僅讓數(shù)據(jù)重復(fù)性差,折騰半天結(jié)果也沒法用,依利科技提供實(shí)用的技術(shù)支持,幫著解決這些麻煩,為您整理常見基線問題處理方式。


?一、基線不穩(wěn)定的表現(xiàn)?


基線噪聲大是容易發(fā)現(xiàn)的,好好的一條線,突然布滿小毛刺,這樣一來峰積分就沒法準(zhǔn)確計(jì)算,儀器靈敏度也跟著下降,那些含量低的組分,很可能就檢測不出來了。?

基線漂移也很常見,就是基線慢慢上爬或下滑。它帶來麻煩的是,有時(shí)會(huì)將目標(biāo)峰部分甚至全部掩蓋住,造成色譜峰面積積分損失,嚴(yán)重影響定量準(zhǔn)確性,甚至無法進(jìn)行定量分析。?

還有比如泵運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)的脈動(dòng)帶來的基線周期性波動(dòng),對低濃度組分峰的檢測影響非常大,容易引起誤判,甚至直接將這樣的小色譜峰忽略掉。?


二、常見原因及解決方案?


1. 流動(dòng)相問題?

流動(dòng)相就像儀器的 “血液”,它出問題,基線馬上就有反應(yīng)。流動(dòng)相脫好不徹底,氣泡進(jìn)入檢測器的檢測池,就會(huì)引基線上下跳動(dòng),因?yàn)闅馀菰跈z測池里會(huì)干擾光的透過和折射。配制流動(dòng)相的溶劑的純度也要符合要求。如果溶劑純度低,里面的雜質(zhì)隨流動(dòng)相進(jìn)入檢測系統(tǒng),干擾信號,讓基線變得雜亂。另外,配制好的緩沖鹽溶液放久了,可能會(huì)析出沉淀,pH 值發(fā)生變化,這些都會(huì)導(dǎo)致基線不穩(wěn)。?

解決流動(dòng)相的問題其實(shí)不難。首先脫氣要做好,實(shí)驗(yàn)室常用超聲處理,條件允許的話用在線脫氣機(jī)更靠譜,能持續(xù)去除氣泡。其次,一定要用 HPLC 級溶劑,雜質(zhì)少,能減少干擾。倒溶劑時(shí)要小心,試劑瓶及時(shí)蓋好,避免污染。緩沖鹽流動(dòng)相好現(xiàn)配現(xiàn)用,配好后盡快使用,別放太久,防止析出沉淀或 pH 變化。?

2. 檢測器問題?

檢測器是接收信號的關(guān)鍵,它狀態(tài)不好,基線肯定受影響。氘燈、鎢燈用久了會(huì)老化,能量不足,發(fā)出的光不穩(wěn)定,檢測器接收的信號就會(huì)波動(dòng),基線自然不穩(wěn)。流通池也容易出問題,里面臟了或者有氣泡沒排凈,會(huì)影響光的傳播,導(dǎo)致信號異常,基線要么有噪聲,要么就漂移。?

處理檢測器問題,先檢查燈的能量。一般氘燈使用壽命在 1000-2000 小時(shí),快到時(shí)間或者感覺能量明顯下降,就及時(shí)更換。流通池臟了,用甲醇或稀硝酸超聲清洗,把臟東西和氣泡清理掉,讓它保持潔凈。?

3. 泵或系統(tǒng)問題?

泵是推動(dòng)流動(dòng)相的動(dòng)力,它出問題,整個(gè)系統(tǒng)都穩(wěn)不了。泵的密封圈磨損了,可能會(huì)漏液,或者導(dǎo)致壓力波動(dòng),流動(dòng)相流速不穩(wěn)定,基線就會(huì)跟著晃。單向閥堵塞也很麻煩,會(huì)讓流速忽快忽慢,系統(tǒng)無法平穩(wěn)運(yùn)行,基線肯定不穩(wěn)定。?

解決泵和系統(tǒng)的問題,定期維護(hù)是關(guān)鍵。發(fā)現(xiàn)泵密封圈磨損,趕緊更換,這是泵正常工作的基礎(chǔ)。單向閥堵塞了,用異丙醇浸泡 10 分鐘左右,再超聲清洗,通常能清除堵塞物,讓單向閥恢復(fù)正常。?

4. 色譜柱問題?

色譜柱是分離組分的核心,它狀態(tài)不佳也會(huì)導(dǎo)致基線問題。用久了,色譜柱里會(huì)積累污染物,柱效下降,分析時(shí)可能出現(xiàn)異常峰或基線波動(dòng)。另外,柱溫波動(dòng)也有影響,溫度變化會(huì)改變組分在固定相和流動(dòng)相中的分配,影響保留時(shí)間,進(jìn)而導(dǎo)致基線漂移。?

保養(yǎng)色譜柱,要定期沖洗或再生,具體方法參考色譜柱說明書,按步驟去除污染物。同時(shí),用柱溫箱穩(wěn)定柱溫,減少溫度波動(dòng),這樣基線能穩(wěn)定不少。?

5. 環(huán)境干擾?

外界環(huán)境的干擾也不能忽視。實(shí)驗(yàn)室電壓不穩(wěn),檢測器供電受影響,信號會(huì)波動(dòng),基線噪聲增大。周圍的電磁干擾也頭疼,像離心機(jī)、空調(diào)這些設(shè)備運(yùn)行時(shí)產(chǎn)生的電磁信號,可能干擾檢測器,讓基線不穩(wěn)。?

應(yīng)對環(huán)境干擾,首先給儀器接穩(wěn)壓電源,保證供電穩(wěn)定。其次,放置儀器時(shí)遠(yuǎn)離電磁干擾源,同時(shí)做好儀器接地,減少電磁干擾的影響。?


三、日常維護(hù)建議(預(yù)防措施)?


做好日常維護(hù),能大大減少基線不穩(wěn)的問題。?

流動(dòng)相管理上,堅(jiān)持用 HPLC 級溶劑,避免因純度問題引入干擾。每次使用前,脫氣處理要到位,不管是超聲還是在線脫氣,都要保證效果。?

檢測器維護(hù)很關(guān)鍵,記錄好氘燈使用時(shí)間,快到使用壽命時(shí)提前準(zhǔn)備更換,別等能量不足影響實(shí)驗(yàn)。流通池也要定期清洗,保持潔凈,確保檢測信號準(zhǔn)確。?

系統(tǒng)穩(wěn)定性檢查不能少,定期校準(zhǔn)泵的流速,保證流動(dòng)相輸送穩(wěn)定。經(jīng)常檢查管路是否漏液,發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)處理,避免影響系統(tǒng)壓力和流速。?

色譜柱保養(yǎng)也重要,使用保護(hù)柱能減少污染物進(jìn)入分析柱,延長其使用壽命。色譜柱長期不用時(shí),用純有機(jī)相妥善保存,防止填料變質(zhì)。?





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